高效色譜柱是高效液相色譜的心臟，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性，延長柱子的使用壽命非常重要。色譜柱使用時間後就會出現柱壓升高、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時間改變等變化，如不採取措施，將會縮短色譜柱的使用壽命，影響工作效率，並造成一定的經濟損失。因此，有必要加強和規範色譜柱的管理，從而延長色譜柱的使用壽命。
本文從影響色譜柱使用壽命的幾個因素出發，從管理的角度，探討色譜柱的維護與保養。
| 色譜柱的類型
常用的色譜柱填充劑有矽膠和化學鍵合矽膠、離子交換樹脂、凝膠或玻璃微球等填充劑。在化學鍵合矽膠中以十六烷基矽烷鍵合矽膠最常用，辛基矽烷鍵合矽膠次之，氰基或氨基鍵合矽膠也有使用。近年來，由於蛋白質等生物大分子物質分離提純技術的飛速發展，離子交換色譜柱、凝膠色譜柱的應用也越來越廣。
| 影響色譜柱使用壽命的因素
流動相
在以水溶液為流動相時，水溶液中的微生物例如細菌容易生長,當用水溶液或有機酸緩衝液保護柱子時，一些黴菌可能在色譜柱中滋生，堵塞固定相顆粒間的空隙。 由於濕法填充技術的問世，目前普遍使用的色譜柱填料直徑一般都小於 10 um，流動相中的顆粒雜質很容易先沉積在柱頭然後慢慢堵塞柱子。 流動相的pH值對色譜柱也有影響，特別是對化學鍵合矽膠填料，水溶液的 pH 最適範圍在 2~7.5 之間，當 pH > 8 時，矽膠會釋出生成絮狀物堵塞柱子，且難以復原，柱效很快降低,甚至完全失效。 當在緩衝液中加入有機溶劑例如甲醇或乙腈時，鹽類的溶解度下降，會析出鹽沉澱，堵塞柱子。同時流動相中的有機溶劑和鹽會腐蝕色譜柱頭的篩板，產生柱頭凹陷。 流動相的極性對柱子也有一定影響，對於矽膠柱，甲醇、水、冰乙酸等極性較大物質會破壞填料，反之，對於化學鍵合矽膠，極性小的物質如正丁醇、二氯甲烷等也起同樣的作用。鹼性溶液會破壞陽離子交換樹脂色譜柱，而酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱。
樣品和固定相
如果有少量或微量的樣品不能夠溶解在流動相中，在通過固定相會堵塞柱子。樣品中的顆粒雜質也會堵塞柱子。樣品組分例如糖、蛋白質等通過柱子時會產生不可逆吸附，這樣固定相的活性點被覆蓋。
樣品組分還會與固定相產生反應，尤其是對於氨基柱的影響較為嚴重，因為氨基易與酐、酮形成希夫 (Schiff) 縮合而減少活性點，使保留時間縮短。
色譜柱鍵合相基團脫落、固定相分解和活性基團變性以及會影響柱效和保留時間的顯著改變。大多數鍵合相都是通過矽氧矽鍵 (Si-O-Si) 連接在矽基質上，形成帶有有機基團的固定相 Si-O-Si-R (R 為 CnH2n+1)，矽氧矽鍵可能在水溶液中水解而斷裂，使鍵合基團脫落。
| 高效液相色譜柱的管理
色譜柱的管理
制定色譜柱管理的標準操作規程並嚴格執行。每一根新購進的色譜柱必須造冊登記，內容包括：生產公司、品名、型號、規格、購進時間、啟用時間、單價、柱內保護溶液等。色譜柱分類存放，矽膠柱、化學鍵合矽膠柱、氰基或氨基柱、離子交換樹脂柱、凝膠柱各用一個色譜柱盒，盒上貼上標籤，註明類別。
隨柱說明書裝入密實袋附在登記本上。每啟用一根色譜柱,在色譜柱上貼上標籤,註明啟用日期。
每根柱子每兩個月保養一次，特別是對於一些使用頻率少的柱子，因為放置時間長，容易乾柱，每一次做好保養記錄。
對於確已失效的柱子，做好停用記錄，不能隨意丟棄，專門存放，如果現用的柱子的填料需要填補，可以用存放的柱子的填料。在從事生產的單位的質檢部門，對於使用時間較長柱效降低的柱子，可把它用於檢測產品的中間體。
色譜柱的保養
色譜柱使用一段時間後，常遇到柱子被污染，柱效會有一定程度的下降，採用適當的方法對色譜柱進行保護，可以延長色譜柱的使用壽命。
樣品和流動相的處理
溶解的樣品進樣前用濾膜過濾，以除去不溶物。如果必要，需進行樣品的預處理。流動相中如有不純物質將影響效，所以溶劑盡量使用色譜級別的，至少是分析純級別，流動相使用前用微孔薄膜過濾。
在流動相的輸液管前安裝過濾器。過濾器定期用甲醇超聲清洗，如果效果不好，可用 10% 的稀硝酸浸泡清洗。對於堵塞嚴重的過濾器，可在火焰上灼燒後再清洗。
保護柱 (預柱) 的使用：
對於較昂貴的色譜柱，可以在柱前加一保護柱，防止樣品中雜質污染分析柱，對於製備柱，因其進樣量大，使用保護柱尤為重要。
常規處理：
矽膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱每一次用完後用低流速長時間的二氯甲烷或正己烷等溶劑沖洗；鍵合相矽膠色譜柱、離子交換色譜柱和凝膠色譜柱先用蒸餾水沖洗，再用甲醇沖洗，然後用甲醇與蒸餾水以一定比例混合的溶液沖洗後過夜。
對於已使用一段時間後柱效下降的色譜柱可按以下方法進行再生。
再生處理包括活化 (右→左) 和淨化 (左→右) 兩種。矽膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱按下列順序沖洗：三甲基戊烷或己烷 ←→ 三氯乙烷 ←→ 乙酸乙脂 ←→ 丙酮 ←→ 乙醇 ←→ 水。鍵合相矽膠柱：蒸餾水 ←→ 甲醇 (沖洗過程中可加入少量二甲基甲酰胺)。
離子交換樹脂柱：
高濃度的 NaCl 溶液 (1-2 molL 的 NaCl 溶液) 可使大部分樹脂再生，油脂等少數與樹脂緊密結合的物質可用低濃度鹼溶液 (如 0.1 molL 的 NaOH 溶液) 沖洗，酸性有機物吸附在固定相的用低 pH 緩衝液沖洗，鹼性有機物用高 pH 緩衝液沖洗，然後再用蒸餾水 ←→ 甲醇 ←→ 二氯甲烷 ←→ 甲醇 ←→ 蒸餾水沖洗。
凝膠色譜柱：
由於凝膠色譜柱是根據被分離物質的分子量大小而分離物質，通常用稀的氫氧化鈉或非離子型去垢劑 (0.2% – 1% NP – 40 或 Lubrol) 沖洗可除去大部分的結合物質，如果一些污染物仍然不能清除時，用 24% 或 30% 乙腈沖洗過夜可除去疏水蛋白，用 30% – 50% 乙酸可除去親水蛋白，用蛋白水解酶處理可分解凝膠中剩餘的痕量胃蛋白酶，然後再用蒸餾水 ←→ 甲醇 ←→ 蒸餾水沖洗。
已污染的色譜柱的處理：
因保留強的物質污染，流動相或樣品中不溶物沉積於柱頭，可用下列方法洗滌：去除脂類可用四氫呋喃、乙腈或甲醇洗滌；去除蛋白質可用乙腈、丙醇和 1% 三氯乙酸進行梯度洗脫；一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脫，同時反复注入 100 – 200 ml 的四氫呋喃。
柱頭處理：
對於柱頭堵塞污染嚴重的情況而且用溶劑沖洗無效的色譜柱，只有打開柱子去除柱頂的填料重裝：先拆下不銹鋼燒結過濾器，檢查柱床，常見凹陷或受污染的帶色填料，剔去不規則床層和帶色填料，使柱床顯白色並完全水平，再用甲醇作糊狀填料勻漿液，將糊狀填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中排出甲醇液，重複直到填料水平。
柱子的貯存：
首先柱子必須清洗乾淨後才能貯存，柱子不能貯存在水或水性溶劑中，否則會引起微生物的滋生。 極性色譜柱可用適當溶劑如二氯甲烷沖洗；鍵合相色譜柱用甲醇沖洗；陰離子交換色譜柱用 0.002% 洗必泰 (雙氯苯雙胍己烷) 的緩衝液沖洗,陽離子交換色譜柱用 0.005% 硫柳汞緩衝液沖洗；凝膠色譜柱用緩衝液中加 0.02% 疊氮化鈉或用 20% 乙醇沖洗。再將柱子兩頭密封，以防止溶劑蒸發使柱子乾燥而引起柱子結構的幾何學改變。
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