| 摘要
在分析方法考察過程中，化學家經常評估純化過程化合物在不同色譜柱下的化學特性，例如：對於手性化合物的純化，通常在高效液相色譜分析中篩選幾種類型的色譜柱，儘管不同類型的色譜柱，有著很大的化學差異性，儘管 ACCQ Prep 製備色譜系統上可以安裝、使用各種類型色譜柱，ACCQ Prep 可以通過只需對一種類型的色譜柱單次校準計算出聚焦梯度，該校準不局限於單個色譜柱，通用校準也可以用於不同化學特性的色譜柱，只要分析型色譜柱有相同的尺寸和使用相同的梯度和流速，就允許快速和簡便的色譜方法篩選。
| 背景
許多實驗室，例如那些進行手性物質純化的實驗室，使用多種類型的色譜柱和溶劑進行方法開發，一般從對保留時間和分離度的初步評估開始，然後，偵測運行可以用來創建 ACCQ Prep 聚焦梯度的高效液相色譜製備方法，色譜柱安裝後，ACCQ Prep 製備型 HPLC 的 PeakTrak® 軟件具有內置校準、計算偵測方法，這種內置校準的工作適用於所有色譜柱，無論色譜柱的製造商。 ACCQ Prep 外部 HPLC 校準同樣可以用於各種類型色譜柱，只要分析柱的尺寸相同，並且使用相同的梯度。
| 實驗和結果
C18 色譜柱運行與 C8 色譜柱校準
通用測試混合物 (PN 60-5234-835) 在 RediSep® C8 製備色譜柱 (20 × 150 mm, 5µ, 200Å, PN 69-2203-858) 上運行，使用甲醇/水溶劑系統，得到第一個保留時間在 6 min 的洗脫峰，如在 Teledyne ISCO 網站 Technical Note 52 (TN52) 所述的《校準分析型 HPLC 系統》。
相匹配的 C8 UHPLC 色譜柱 (2 × 50 mm, PN 69-2203- 853) 在水/甲醇體系中運行 (5 min 5 – 100% B，在 100% 甲醇下等度保持 2.5 min)，峰洗脫時間為 3.757 min，對應於 ACCQ Prep 上的峰洗脫時間為 6 min。
製備色譜運行
C8 分析柱更換為 RediSep Prep UHPLC C18 分析柱 (2 × 50 mm, PN 69-2203-854)，測試混合物在水/甲醇梯度中運行，梯度與 C8 柱相同。正如預期的那樣，由於 C18 色譜柱填料 100Å 孔徑使得保留增加，化合物在梯度中較晚被洗脫。
使用 C18 分析運行的數據計算 圖2 中的製備型梯度，同時使用 圖1 中的 C8 色譜柱的校準。製備純化是採用 RediSep Prep C18 柱 (20 × 150 mm, 5µ, 100Å, PN 69-2203-810)。兩種情況下，化合物洗脫時間都接近預期的 6 分鐘洗脫時間。
同時在 C8 製備型高效液相色譜柱上運行測試混合物，並進行 C8 校準；利用 圖1 中的分析數據計算第 2 洗脫峰在 4.451 min 時的梯度。
色譜圖看起來與 C18 柱幾乎相同，唯一的區別是由於兩色譜柱之間的保留差異聚焦梯度開始和結束的溶劑組成不同。
矽膠色譜柱運行與 C18 校準
4.6 × 150 mm RediSep Prep C18 柱在 AgilentHPLC 分析系統上進行校正，如 TN52 中所述，梯度 6 min 內從 5 到 100% 甲醇，然後以 1.0 mL/min 的流速 100% 甲醇保持 6 min。溶劑改為正己烷/乙酸乙酯，色譜柱改為 4.6 × 150 mm RediSep Prep 矽膠柱。同樣的梯度法用於新溶劑體系和色譜柱，梯度 6 min 內 5 至 100% 乙酸乙酯，將 methyl paraben 樣品注入，在 20 × 150 mm 的 RediSep Prep 矽膠柱上，在正己烷/乙酸乙酯中進行聚焦梯度的保留時間如 圖4 所示，樣品在計算梯度的中間附近被洗脫。
| 結論
在 PeakTrak 聚焦梯度生成中，對於某類化學特性的色譜柱校準可用於另一類化學特性的色譜柱，這允許在選擇分析、製備系統色譜柱的更多靈活性，並確保適當的可擴展性。
遵循一個簡單的規則，在使用外部 HPLC 分析柱的長度和內徑尺寸相同情況下，然後運行具有相同的梯度和流量。這允許用戶使用分析型 HPLC 偵測運行不同的色譜柱和溶劑系統，以確定具有較高樣品承載能力的最佳淨化方法。
