摘要：本文介紹了在反相 MPLC 中，因成本或溶劑可獲得性問題替換溶劑的方法。透過列線圖可估算新溶劑濃度以配合原方法效果，也探討了等度洗脫與梯度洗脫的應用及不同溶劑選擇性差異的利用。
一、摘要
由於成本或溶劑的可獲取性，有時有必要在反相 MPLC 中採用與原方法不同的溶劑。許多方法使用乙腈，但在純化規模放大時，可能更傾向於使用其他溶劑。為了提高純化效果，可能需要進行溶劑替換。
本應用說明描述了一種方法，可以簡單地估算替代溶劑的濃度，以獲得與原方法所用溶劑相似的結果。
二、討論
在反相層析法中能夠更換溶劑，這使得從分析規模轉換到製備規模成為可能，或透過替換溶劑來節省成本。當所需溶劑不可取得時，溶劑替換也是有用的。
圖 1 的列線圖列出了反相中常用的各種有機溶劑的等效濃度。透過使用垂直線連接目前溶劑濃度與新溶劑的濃度來讀取新溶劑的濃度。 40% 乙腈 (MeCN) 的溶劑可以替換為 50% 甲醇 (MeOH) 或 30% 四氫呋喃 (THF)，以獲得相同的純化效果。實際上，根據化合物的不同，這可能會有所 ± 5% 的變化，但使用列線圖將提供一個接近的起點。
圖 1 溶劑間轉換時，確定有機溶劑組成的列線圖
等度洗脫
所有實驗都是使用吸附在矽藻土上的尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，並透過固體負載柱進行的。這些實驗與採用 40% 乙腈的分離效果進行了比較。等度洗脫對溶劑濃度非常敏感。圖 2 顯示 40% 乙腈的純化結果與根據圖一找到的對應溶劑濃度純化的解果。將甲醇和四氫呋喃的濃度調整 5%（圖 3）可使純化效果更接近原始的乙腈運作結果。
圖 2 使用基於列線圖的等度洗脫方法純化尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的結果
圖 3 使用調整後的等度洗脫法純化尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的結果
由於溶劑與不同化合物類別之間的選擇性差異，很難使在不同溶劑中運行的色譜圖完荃匹配。改變沖提溶劑可以利用來調整洗脫化合物之間的間距。在這個範例中，四氫呋喃 (THF) 與甲醇和乙腈相比顯示出顯著差異。
梯度洗脫
大多數 MPLC 純化都是使用梯度洗脫進行的。為了推定不同溶劑所適用的梯度，只需以上述方式於列線圖找出對應衝提濃度後，以等梯度方法運行即可。對於圖4的例子，梯度從 5% 乙腈跑到 95% 乙腈。使用列線圖得到了5% 至 95% 甲醇和 5% 至 69% 四氫呋喃的梯度。
三種溶劑都表現出了純化效果，但選擇性略有不同。選擇性差異是因為溶劑之間的轉換是非線性的。依照本文闡述方法來調整反向沖提的有機溶劑可快速找到更好的通提條件。
圖 4 使用乙腈、甲醇和四氫呋喃對尼泊金甲酯和尼泊金丙酯進行梯度純化的層析圖
三、結論
C18 方法可根據溶劑的可取得性或成本輕鬆轉換為替代溶劑。此外，溶劑替換列線圖提供了一種選擇方法，協助挑選不同的溶劑選擇性。
