概述
本文討論有關內毒素檢測的樣品「批量檢測（Batch Testing）」和樣品「保存時間（Hold Times）」，以及如何透過簡單研究來最大化提高檢測效率。品質控制實驗室和研發實驗室並不都是高通量實驗室。許多實驗室每天或每週只收到少量需要進行鱟試劑的樣本。為了讓鱟試劑檢測更省錢、更有效率，實驗室會先將樣本保存起來，攢夠一定數量的樣本時，才會用 96 孔板或 Sievers® Eclipse 微孔板進行「批量檢測」。大量檢測能為使用者節省昂貴的鱟試劑。
確定樣品保存時間的重要性
進行批量檢測可以提高檢測效率、降低總檢測成本。然而，不少實驗室的內部「標準操作規程（SOP，Standard Operating Procedure）」列明了檢測的時間要求，例如必須在收到樣品或採集樣品後的 24 小時內進行檢測。這種時間限制使小型實驗室無法保存批量樣品，而實際需要進行的檢測並非如此急迫。監管部門並未強制要求使用者在一定時間內進行檢測，而「良好生產規範（GMP，Good Manufacturing Practice）」普遍要求使用者在樣本不損失內毒素的前提下確定正確的檢測時間要求，也就是「樣本保存時間」。研究並確定正確的樣品保存時間，能夠為平衡檢測的品質、成本、效率提供關鍵依據，也有助於使用者了解何時應將樣品送達實驗室進行分析，何時可以獲得檢測結果。
研究內毒素檢測的樣本保存時間
為了節省昂貴的鱟試劑、消耗品成本，提高微孔板的使用率，使用者應進行簡單的樣品保存時間研究，以確定在批量檢測的樣品保存時間超過 24 小時的情況下樣品不會損失內毒素。樣品保存時間研究旨在幫助品質控制實驗室制定正確的「標準操作規程」，明確規定樣品在檢測之前可以存放的時間¹。樣品保存時間研究的重要內容之一是存放樣品的容器。用於內毒素檢測的樣本應採集並存放在不干擾鱟試劑檢測和不吸收內毒素的容器中。聚丙烯容器會吸收內毒素，而聚苯乙烯或硼矽酸鹽玻璃容器是最佳的樣品容器。
至少對 4 個時間點進行樣本保存時間研究，才能確保研究結果有效且準確²。例如，研究的時間點可以選在第 0 天、第 1 天、第 3 天、第 7 天。可以對水樣品、製程樣品、原料樣品、甚至成品藥樣品進行保存時間研究，以確定檢測前的有效保存時間。在進行保存時間研究時，對每種樣本加入已知濃度的內毒素。建議使用者在標準曲線中點處加入盡量低的濃度的內毒素。但加入的濃度越高，越能在 2 倍該濃度內回收樣品。例如美國注射劑協會（PDA）「TR 82 技術報告」中規定加入的濃度為 5 EU/mL (EU/mL：每毫升內毒素活性單位)²。在建議的所有時間點檢測樣品，測量並確認樣品未損失內毒素。
如果不進行研究就保存樣品，檢測就可能出現假陰性結果，導致病患安全風險。實驗室一旦確認樣品在 7 天內未損失內毒素，就可以在「標準操作規程」中規定樣品的保存時間或要求的檢測時間可以延長到 7 天，以便每週一次性集中檢測所有保存的樣品，而非每天都耗費精力來檢測樣品。
Sievers Eclipse 提高檢測效率
Sievers Eclipse 是完全合規的內毒素檢測平台，符合 USP <85>、EP 2.6.14、JP 4.01、ChP <1143> 等藥典的要求。本平台提供包含5個參考標準品內毒素（RSE，Reference Standard Endotoxin）濃度的嵌入式標準曲線，濃度範圍為 50 – 0.005 EU/mL，一式三份，為每個樣品提供嵌入式陽性產品對照液（PPC, Positive Product Control）。此平台是高通量內毒素檢測平台，使用者可在單次檢測中大幅增加樣品數量，從而提高檢測效率、降低整體成本。已經或打算延長樣本保存時間的用戶在用Eclipse進行檢測時，可以採用鱟試劑「凍融法（Freeze-Thaw）」。事實證明，在初次重建後冷凍鱟試劑，稍後在 Eclipse 上用解凍的該試劑來檢測樣品，檢測結果與非凍融法完全一致³。
結論
GMP 建議使用者為樣品檢測確定正確的樣品保存時間。使用者可以進行簡單研究，最大化提高品質控制實驗室的樣品檢測通量，大幅減少整體操作時間，進而提高實驗室的效率、降低成本。
參考文獻
H.Skalski. Low Endotoxin Recovery Hold-Time Study Considerations. Charles River Laboratories, April 2020.
PDA Technical Report No. 82. Low Endotoxin Recovery. PDA, 2019.
LAL Reagent Storage Evaluation Using the Sievers* Eclipse BET Platform. Sievers Analytical Instruments, 2022.
